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PCR反應出現(xiàn)非特異性擴增帶分析

日期:2025-04-18 02:42
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摘要: PCR反應出現(xiàn)非特異性擴增帶分析: PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預計的大小不一致,或大或小,或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶 與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現(xiàn),其原因:一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低,及PCR循環(huán)次數(shù)過多有關。其次,是酶的質和量,往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn),酶的量過多有時也會出現(xiàn)非特異性擴增。其對策有: 1、必要時,重新設計引物。 2、減低酶的量或調(diào)換另一來源的酶。 3、降低引物量,適當增...

PCR反應出現(xiàn)非特異性擴增帶分析:

PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預計的大小不一致,或大或小,或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶 與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現(xiàn),其原因:一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低,及PCR循環(huán)次數(shù)過多有關。其次,是酶的質和量,往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn),酶的量過多有時也會出現(xiàn)非特異性擴增。其對策有:

1、必要時,重新設計引物。

2、減低酶的量或調(diào)換另一來源的酶。

3、降低引物量,適當增加模板量,減少循環(huán)次數(shù)。④適當提高退火溫度或采用二溫度點法(93℃變性,65℃左右退火與延伸,也叫兩步法)

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