亚洲国产精品suv|www.久久av|精产国品一二三产区区别大吗|久久国产成人

PCR反應設(shè)計引物介紹

日期:2025-04-17 13:27
瀏覽次數(shù):98
摘要: PCR反應五要素: 參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+。 引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。 ...

PCR反應五要素:


參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+。


引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則:


①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。


②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。


③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。


⑤引物3'端的堿基,特別是zui 末及倒數(shù)第2個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。


⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。


⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。


引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

亚洲国产精品suv|www.久久av|精产国品一二三产区区别大吗|久久国产成人

69久久久| 国产精品国产三级国产普通 | 爽娇妻快高h多p| 中文字幕亚洲综合| 97精品人妻一区二区三区| 天堂资源在线| 舌头伸进去添的我爽高潮视频 | 久久久久久精品| 91精品国产自产在线观看 | 不忠大尺度吸乳视频| 欧美国产日韩在线| 把她日出水了好紧大爽了视频| 蜜桃成人在线观看| 精品一区二区三区四区av| av在线黄色| 国产精品久久久久久人妻精品| 国产女人高潮抽搐喷水视频| 偷拍av一区| 高清欧美性猛交xxx| 最近中文字幕在线中文高清版| 少妇高潮露脸国语对白| 免看一级a一片成人久久| 丰满的少妇xxxxx野外多毛| 久久综合久久综合久久综合| 国产精品久久久久久| 天天操天天射天天干| 国产成人一区二区| 狠狠内射| 丰满少妇被猛烈进入在线看| 人妻少妇嫩草av蜜桃久久久久| 亚洲va国产天堂va久久 en| 欧美精品欧美极品欧美激情| 美女18禁无遮挡| 久久毛片网| 亚洲国产精品久久久久| 精品裸体舞一区二区三区| 人成视频在线免费观看| 久久久久久久69| 巨大黑人xxxxx高潮后处理| 黄aaaaa片免费| √天堂8中文在线|